本研究納入了TCGA數(shù)據(jù)庫531例RCC的患者，使用了生物信息學(xué)分析、免疫組織化學(xué)、免疫印跡等技術(shù)對(duì)KIR2DL4是否由RCC表達(dá)及其在RCC進(jìn)展中的可能作用進(jìn)行了研究。

三、研究結(jié)果
NO.1 KIR2DL4在RCC中過量表達(dá)

    在本研究中，利用GEPIA在線分析工具進(jìn)一步分析了不同等級(jí)RCC的KIR2DL4  mRNA表達(dá)水平，我們發(fā)現(xiàn)KIR2DL4的mRNA表達(dá)隨著RCC等級(jí)的增加而增加 (圖1a) 。

圖1  KIR2DL4在RCC細(xì)胞系中的蛋白表達(dá)情況。

GAPDH被用來作為內(nèi)參。

NO.2  敲低KIR2DL4的表達(dá)會(huì)降低Caki-1和769-P細(xì)胞的細(xì)胞活力和細(xì)胞系形成

    通過轉(zhuǎn)染KIR2DL4-shRNA敲低KIR2DL4在Caki-1 和769-P細(xì)胞中的表達(dá)，并檢查其對(duì)它們?cè)鲋潮硇偷挠绊?。結(jié)果如圖2c和3c所示，KIR2DL4敲低可以明顯降低約35% Caki-1和769-P細(xì)胞的活力。在細(xì)胞周期檢測(cè)中，KIR2DL4敲低后約50%~70%的細(xì)胞 G1/G0停滯(圖2d和3d) ，這表明KIR2DL4敲低抑制了Caki-1和769-P細(xì)胞的細(xì)胞系形成。

圖2 KIR2DL4敲低可以減少Caki-1細(xì)胞的增殖。

圖3  KIR2DL4敲低可以抑制769-P細(xì)胞的增殖，

KIR2DL4敲低對(duì)細(xì)胞周期分布的影響。

 NO.3   KIR2DL4可影響腫瘤相關(guān)途徑和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K) /AKT信號(hào)途徑

    免疫印跡檢測(cè)顯示，在KIR2DL4高表達(dá)的Caki-1和769-P細(xì)胞中，磷酸化的AKT水平被上調(diào) (圖4c) ，而在KIR2DL4敲低的Caki-1細(xì)胞中，磷酸化的AKT水平在KIR2DL4被敲低后下降 (圖4d)，這些觀察表明，KIR2DL4可能通過PI3K/AKT途徑促進(jìn)RCC的進(jìn)展。

圖4 通過免疫印跡分析KIR2DL4過表達(dá)或敲低后的AKT磷酸化水平，GAPDH用作內(nèi)參。

四、小結(jié)與啟發(fā)
    在過去的十年中，一些靶向藥物被美國食品和藥物管理局 (FDA)批準(zhǔn)用于RCC治療，包括索拉非尼、舒尼替尼、替米羅莫司和Ever-olimus[1-3]。在這個(gè)時(shí)間框架內(nèi)，RCC的中位總生存率有了明顯的改善。此外，隨著2015年FDA批準(zhǔn)nivolumab用于晚期RCC患者，免疫療法也在重新興起[4-5]?？偟膩碚f，RCC的免疫療法正在獲得研究興趣。

    在本研究中，我們的研究結(jié)果表明KIR2DL4在RCC細(xì)胞中過度表達(dá)，而KIR2DL4的敲低或過度表達(dá)可以分別抑制或促進(jìn)RCC細(xì)胞增殖。此外，過表達(dá)KIR2DL4的Caki-1和769-P細(xì)胞的pAKT水平更高，這表明KIR2DL4可能通過PI3K/AKT信號(hào)通路促進(jìn)RCC的進(jìn)展。基于該研究結(jié)果，有望為尋找潛在的RCC抗癌候選藥物提供理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

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